tmt串联质谱技术？ tmt质谱定量技术原理？

一、tmt串联质谱技术？

串联质谱标签（TMT）系统可以在一次实验中对多个样品在全蛋白质组水平同时进行定量分析，是应对以上三个挑战非常有效的策略。

TMT标记试剂由氨基反应基团，质量平衡基团，以及报告离子基团组成。每个TMT标签的氨基反应基团的结构式和质量相同，但5个稳定重同位素在不同TMT标签的报告离子基团和质量平衡基团之间的分布不同。被不同TMT标签标记的肽段在质谱一级谱图上有相同的质荷比。经过高能碰撞解离，这些肽段在随后的二级谱图或者三级谱图上产生质量不同的报告离子。这些报告离子实现了对不同样品的准确定量。经过多年的发展，TMT标记试剂从最初的6通道已发展到11通道，但受其结构限制已经无法继续增加通量。

二、tmt质谱定量技术原理？

Tandem Mass Tag (TMT) 是 Thermo Scientific公司的专利产品，用于标记不同的蛋白样品并同时进行高通量的 LC-MS/MS 的定量研究 。目前有 2-、6-、10- 等 3种通量类型，可分别平行处理 2个、6个和 10个样品，显著提高了蛋白样品质谱检测的通量，减少所需质谱机时；同时，由于采用了稳定同位素标记不同样品，在标记实验之后所有样品混合成一个进行后续处理，大大降低了实验误差，使得定量准确性显著提高。

TMT 标记定量实验流程:

2-、6-、10-个样品分别提取总蛋白，取等量蛋白进行 Trypsin 酶切，得到相应样品的多肽；分别用不同的 TMT 标签对 2-、6-、10- 个样品进行标记，随后等量混合成一个样品并进行LC-MS/MS 分析和后续的数据库比对，鉴定出样品中含有哪些蛋白以及每个蛋白在样品中相对含量。

三、质谱技术有哪些应用？

近年来质谱技术发展很快。随着质谱技术的发展，质谱技术的应用领域也越来越广。由于质谱分析具有灵敏度高，分析速度快，样品用量少，分离和鉴定同时进行等优点，因此，质谱技术广泛的应用于化学、能源、运动医学、刑侦科学、医药、化工、环境、生命科学、材料科学等各个领域。

　　质谱仪种类繁多，不同仪器应用特点也不同，一般来说，在300C左右能汽化的样品，可以优先考虑用质谱进行分析，得到的质谱信息多，可以进行库检索。毛细管柱的分离效果也好。质谱仪的分辨率是一项重要技术指标，高分辨质谱仪可以提供化合物组成式，这对于结构测定是非常重要的。

　　质谱分析法对样品有一定的要求。进行质谱分析的样品应是有机溶液，水溶液中的有机物一般不能测定，须进行萃取分离变为有机溶液，或采用顶空进样技术。有些化合物极性太强，在加热过程中易分解，例如有机酸类化合物，此时可以进行酯化处理，将酸变为酯再进行GC-MS分析，由分析结果可以推测酸的结构。如果样品不能汽化也不能酯化，那就只能进行LC-MS分析了。进行LC-MS分析的样品最好是水溶液或甲醇溶液，LC流动相中不应含不挥发盐。

四、什么是流式技术？

就是把连续的影像和声音信息经过压缩处理后放上网站服务器,让用户一边下载一边观看、收听，而不要等整个压缩文件下载到自己的计算机上才可以观看的网络传输技术。

该技术先在使用者端的计算机上创建一个缓冲区，在播放前预先下一段数据作为缓冲，在网路实际连线速度小于播放所耗的速度时，播放程序就会取用一小段缓冲区内的数据，这样可以避免播放的中断，也使得播放品质得以保证。

五、质谱技术和基因测序技术的区别？

质谱技术和基因测序技术同为精准医疗的底层技术。基因测序是基因组学的测定技术，而质谱则用于代谢组学的测定。通常，基因组学的信息决定了个体的遗传性状，而对代谢组学的刻画则可以提供个体患病的信息。

目前，质谱的应用远不及基因测序普及，最常见的质谱检验是新生儿筛查。目前，国内有近三成的新生儿筛查是采用的是质谱技术，而美国则完全利用质谱检测来完成这项筛查。

六、prm质谱技术的成型步骤？

步骤：首先要明确目标蛋白（或多肽）是什么，设计和建立针对这些目标蛋白PRM质谱采集方法，然后对待测样品进行PRM数据采集，将得到的原始谱图数据导入分析软件提取子离子信息进行定量。

另外，如果配制已知浓度的标准肽段，用PRM额外做一个标准曲线，即可实现绝对定量。

七、什么是流式荧光技术？

FISH，荧光原味杂交，应用荧光标记的DNA探针检测细胞中的特定基因是否表达、表达的量、是否异常、表达位置等信息，使用仪器是荧光显微镜；

融合基因，会提取检测细胞cDNA，应用已知融合基因引物kit，在RT-PCR仪检测进行扩增，如果存在融合基因，则可扩增出相应的产物，根据产物的荧光强度，还能检测出融合基因含量；

流式细胞术，使细胞形成单细胞悬液，应用荧光标记的抗体分子标记细胞，根据荧光分子表达情况检测细胞表面目的抗原。

关系：都应用荧光技术进行检测，

区别：检测的目的、方法、仪器均不同（顺带说一句，FISH和流式可以合作检测端粒酶，这种技术叫“FISH－Flow”因为是用流式仪检测的）

八、流式荧光免疫技术原理？

将荧光标记后的单细胞（或颗粒）悬液进入吸样管，进而随鞘液进入流动室。

进入流动室之前的管道变细，迫使鞘液从四周、样本在中心进入流动室，在外加压力的作用下由下向上（或由上向下）直线流动。

鞘液充满流动室将样品裹挟，当二者通过流动室喷嘴流出时，压力迫使鞘液包裹的液滴包含单一细胞或颗粒垂直通过检测区。

九、流式荧光技术怎么样？

紫色激光器荧光染料 405 nm 激发。适用于丰度较高的抗原。

绿色和黄绿色激光器的荧光染料 532 561 nm 激发。用于配有合适的滤光片通道的流式细胞仪光耐受强并且不依赖于PH值，是荧光显微镜技术的最佳选择

蓝光激光器荧光染料 488 nm 激发。适用于荧光显微镜技术。

红光激光器荧光染料 633 nm 激发。适用于配备氦氖激光器或红色二极管激光器的流式细胞仪。

十、流式细胞技术检测目的？

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。

光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。临床中运用流式细胞仪进行外周血白细胞、骨髓细胞以及肿瘤细胞等的检测是临床检测的重要组成部分。